尊龙凯时人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM+10%FBS+1%P
传代方法：首次建议1:2传代。
传代情况：每2天换液。
备注：用无菌离心管收集瓶中培养基，以备对比培养。如对比培养效果不理想，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，请将其培养至良好状态，然后注入完全培养液，封好瓶口以确保运输细胞的稳定性。使用75%酒精喷洒整个细胞瓶以消毒，随后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以再次稳定细胞状态，再行处理。建议在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（最好包含40x、100x、200x的照片）。前三天的照片将作为重要的售后依据，若未提供照片则视为收到状态良好。（传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基进行对比培养，并在换液后将瓶盖松开）。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，请将瓶中的完全培养液收集至离心管，留5ml完全培养基于37℃、5%CO2孵箱中培养；若细胞密度超80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞生长情况，若大部分细胞变圆并脱落即刻轻敲培养瓶并加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，重悬于1-2ml完全培养基中。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，显微镜下观察细胞，当细胞变圆后加5ml完全培养基终止消化，并轻轻吹打使其脱落，随后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，沉淀的细胞加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接置入-80℃冰箱，如果需要转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放超过24小时后进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无冰晶产生后，外壁用75%酒精擦拭。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放入37℃、5%CO2培养箱继续培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基，继续培养。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中可能会出现脱落的现象，这是正常的。如有较多细胞脱离，请将培养瓶内的培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，并收集上清作过渡培养（后期用于对比培养）。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基停止反应。再进行离心，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬。按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新培养基至5-8ml/瓶，最后置于37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题时的重发条件及判定标准：

1. 细胞在运输过程中出现丢失、瓶破损或液漏等问题，提供有效凭证可重发；
2. 若收到产品48小时内发现细胞污染，需提供真实实验结果并核实，合格后方可重发；
3. 常温发货的细胞在静置24小时或干冰发货的细胞在复苏24小时后若大多数细胞不存活（需提供状态照片），则可申请重发；
4. 干冰发货的细胞在复苏后24小时或常温发货的细胞静置4小时且未开封发现污染可重发；
5. 活性问题需在收到产品7天内提供真实的实验结果，使用台盼蓝染色法检测，如核实后重发；
6. 在收到细胞当天及第2、3天拍摄照片以备查，若3天内未提醒即视为合格。若出现问题需同时提供收到细胞前3天及出现问题时的详细照片及操作步骤，与专业技术人员沟通后，由其判定责任。

2）不予重发的情况包括：

1. 客户造成的细胞污染；
2. 客户操作不当导致细胞状态不佳；
3. 使用非本库推荐的培养体系；
4. 细胞状态不佳且未告知细胞培养前3天的照片；
5. 细胞在培养时受到其他处理；
6. 在收到细胞的2天内未进行告知；
7. 根据实际情况而定。

选择尊龙凯时，确保您的科研工作顺利进行，优质细胞培养服务尽在掌握！